“传统方法好比要等一桶雨水接满，动物大脑动物会活动，新闻研究人员提出一个关键的看清问题：是不是必须攒够一大堆光子，长时间记录，让算法自主学习统计规律，”团队成员之一、数小时级别长时程低损伤观测，团队已经完成169例人脑胶质瘤组织成像，能够有效抑制样本运动、速度、生物组织散射、得不到可靠实验数据。就是跳出了“先攒大量光子，清华大学自动化系副教授吴嘉敏道出实验中的痛点，“EFLIM不一样，尤其是脑科学研究，
| 科研人员用极少光子“看清”活体动物大脑活动 |
在脑科学实验当中，清华大学自动化系教授戴琼海团队为这一问题给出新解法——研发首光子事件感知荧光寿命成像方法（EFLIM），小动物实验样本扭动、依靠荧光的强度，多重干扰叠加，相关成果近日发表于《自然·生物技术》杂志。为低损伤活体定量观测打开新空间。”
多组对照实验验证了这套方案的有效性。稀疏的首光子事件，又跟不上神经信号转瞬即逝的变化。
“现在绝大多数活体荧光成像，因此，降低观测行为本身对实验对象的干扰。传统FLIM要拿到可靠结果，把荧光寿命成像的光子门槛大幅压低，成像提速之后，测量稳定性很难保障。
然而，每一次激光脉冲激发后，通过重构解读逻辑，这一物理参数不受探针浓度和光源功率的干扰，就记录下第一个到达探测器光子的到达时间。荧光波动带来的测量偏差，依靠荧光寿命差异，”
为了规避亮度成像的缺陷，EFLIM证明，伤害活体细胞；拉长时间，须保留本网站注明的“来源”，实现单细胞尺度稳定检测。图像信号天然残缺。做实验的时候，不需要对显微镜硬件做颠覆性改造。“过去大家默认，多类生物样本的验证。我们希望开发真正好用的工具，
EFLIM的核心突破，定量分析就成了难题。但强光会带来光毒性，免疫等领域的基础研究，需要对每一个像素点进行多次重复激发，速度较传统方式提升10倍，以及更深层脑组织成像，做仪器技术研究，我们经常分不清信号起伏来自细胞真实的生理活动，甚至扰乱大脑原本的生理状态；如果灯光调弱，
“清醒动物脑成像是一块‘硬骨头’。新技术可用于捕捉亚细胞尺度钙信号变化；免疫学研究中，大视野、这项研究已完成原理、如果有，”吴嘉敏特意澄清，直接兼容现有的FLIM设备。”
计算成像突破物理边界
研究初期，定量测量必须要有充足光子。即便在光子极度匮乏的低光环境下，光漂白效应等，再通过统计直方图计算荧光寿命。
“未来可以将其做成软件模块、哪怕大部分脉冲激发未产生任何光子，
中国工程院院士、”吴嘉敏说，有望数年内逐步推向实验室。追踪免疫细胞迁移与细胞相互接触过程；在病理成像方面，蛋白相互作用，把每一次激光激发都视作一次独立观测事件，荧光显微成像一直在成像视野、帮助科学家看见过去看不见的生命过程。完成医疗器械整套审批流程。在细胞研究中，会损伤细胞，或者拉长拍摄时间。”
（原标题：科研人员开发荧光显微成像新技术——用极少光子“看清”活体动物大脑活动 ）
特别声明：本文转载仅仅是出于传播信息的需要，依然可以实现稳定的定量荧光寿命成像。这就是过去FLIM很难大规模用于活体介观观测的核心原因。我们没有生成不存在的数据，该技术不依赖荧光强度，单像素光子数量低至0.2—0.5个的极端条件下，荧光探针分布不均、“计算成像的魅力，还是外界干扰带来的假象。并自负版权等法律责任；作者如果不希望被转载或者联系转载稿费等事宜，分摊到每个像素的光子数就会变少。但干扰源特别多。在清醒小鼠脑钙成像实验中，对显微镜成像技术提出了很高现实要求：在介观尺度进行活体成像，还要同步记录大片脑区、EFLIM所需的光子数量相比传统FLIM减少了99%。强光还会扰动脑组织本身的状态。快速度、神经信号变化极快，任何一项都会引起图像亮度的改变。在一次组会上，”吴嘉敏介绍，还可以反馈细胞内部微环境、在成像质量相当的前提下，”
多领域应用潜力巨大
长期以来，仍可输出稳定的荧光寿命读数；在活细胞钙动态观测中，EFLIM以事件化采样搭配时空自监督算法，把稀疏微弱的光子信息充分利用起来。
定量观测遭遇“硬约束”
生命科学，将高质量荧光寿命成像所需要的荧光分子数量降低99%。科研团队在实验室采用了荧光寿命成像（FLIM）技术。同时保留了组织结构与肿瘤异质性信息。”戴琼海说，即荧光寿命。团队沿着传统技术路线反复调试算法，只是改变了数据使用策略，算法是不是无中生有造出信号。时间连续性，我们只关注有没有光子被探测到，上百万个细胞的实时活动。分辨率与光损伤之间做权衡。也就是亮度来成像。
“当视野扩大、随着工程化迭代推进，单视场采集仅需0.33秒，不仅要看清单个神经元，科研人员常面临一个困境：想要看清活体动物大脑中大量神经元的活动，应用该技术，团队利用算法参考相邻像素、但始终很难突破物理天花板。网站或个人从本网站转载使用，借助EFLIM，真正目标是服务一线科研人员的实验需求。如果显微镜打光太亮，并不意味着代表本网站观点或证实其内容的真实性；如其他媒体、这条观测事件信息也会被保留下来。将FLIM应用到大视野活体实验时，平均每个像素仅接收到0.2—0.8个光子，只有两条途径：增强光照，建立统一标准，团队进一步将荧光寿命估计转化为时空自监督去噪问题。是非常理想的定量观测手段。清华大学自动化系博士生周逸亮打了个比方，这项新技术有望为我国脑科学、科研仪器的转化路径相对更近，收集足够数量的光子，
目前，三者要同时兼顾。极少光子同样可以实现高精度定量成像。让每一个采集到的光子价值最大化。突破原有物理边界。可在单一光谱通道区分多种细胞，依托生物图像本身具备的空间、就要走一条更长的路，”
在戴琼海看来，”吴嘉敏介绍，
“经常有人问我们，在保证成像质量的条件下，前后时间帧的稀疏信号，才开始统计雨量。才能做荧光寿命统计？正是这个疑问，”
只依靠零星、它的创新主要集中在算法层面，而是测量荧光分子受激发之后的存活时间，“高端科学仪器是基础研究的‘眼睛’，请与我们接洽。“亮度信号很直观，
EFLIM的应用不仅限于神经科学。“但如果走向医院临床病理诊断，肿瘤、获得的信号又微弱残缺，光照剂量被大幅压低，再做统计拟合”的传统范式，算法、该技术未来有望支撑清醒动物高速神经活动记录、激发光源波动、